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PV ALBEITAR 48/2014    

Evaluación de métodos alternativos de detección de la circovirosis porcina mediante la mezcla de sueros

Evaluación de métodos alternativos de detección de la circovirosis porcina mediante la mezcla de sueros
Recientemente se ha publicado en el Journal of Veterinary Diagnostic Investigation un artículo en el que se investigaba la utilidad de los pooles de sueros para detectar circovirosis porcina mediante PCR. Si la técnica se hubiese mostrado eficaz el diagnóstico hubiese sido sencillo y relativamente poco costoso, pero los resultados han hecho que se desestimase como alternativa a la necropsia y la histología.
Martí Cortey [1,2], Sebastian Napp [1], Anna Alba [1], Emanuela Pileri [1], Llorenç Grau-Roma [1], Marina Sibila [1], Joaquim Segalés [1,3]
1 - Centre de Recerca en Sanitat Animal (CReSA), UAB-IRTA, Campus de la Universitat Autònoma de Barcelona, 08193 Bellaterra, Barcelona.
2 - National Veterinary Institute (SVA), Ulls väg 2B, SE-751 89, Uppsala (Sweden).
3 - Departament de Sanitat Animal. Facultat de Veterinària. Universitat Autònoma de Barcelona, Campus Bellaterra, 08193 Cerdanyola del Vallès, Barcelona.


Actualmente, la circovirosis porcina (CP) se diagnostica individualmente cuando un animal cumple tres requisitos: signos clínicos compatibles con la enfermedad, presencia de lesiones microscópicas en los tejidos linfoides, y presencia de circovirus porcino tipo 2 (PCV2) en estas lesiones. En consecuencia, el diagnóstico de la CP requiere de la necropsia de los individuos sospechosos y de su análisis histopatológico. No obstante, la histopatología es una técnica analítica que no está al alcance de muchos laboratorios diagnósticos a nivel mundial.

Por otro lado, diversos estudios han demostrado que la cantidad de PCV2 (medida como copias de ADN vírico/ml de suero) en cerdos afectados de CP es mayor que en cerdos sanos En consecuencia, diversos autores han propuesto varios límites teóricos de la cantidad de PCV2 a partir del cual un cerdo podría considerarse afectado o no de CP utilizando para ello la PCR cuantitativa.

Mezclar sueros para ahorrar costes es una estrategia habitual en diagnóstico veterinario, especialmente en aquellas enfermedades donde una única muestra positiva implica una situación de riego para un rebaño o un lote de animales, y ha demostrado ser una técnica efectiva y segura en la detección de diferentes infecciones .

El objetivo de este estudio fue analizar la aplicabilidad de la cuantificación de PCV2 proveniente de pooles de sueros (mezcla de sueros) en el diagnóstico de la CP, con intención de desarrollar una herramienta sencilla de diagnóstico de la CP para rebaños o lotes de animales que no necesitara ni el sacrificio ni el análisis post mórtem de los individuos sospechosos.

Para ello se disponía de las cargas víricas y los análisis histopatológicos de 108 cerdos, la mayoría con edades comprendidas entre las 11 y 20 semanas, provenientes de once granjas y catalogados cómo sanos (S), enfermos pero no de CP (E) y afectados de CP (A). Adicionalmente se analizaron las cargas víricas de 50 cerdos sanos de cinco granjas sin presencia de CP.

Toda esta información se utilizó para construir las distribuciones teóricas de las cargas víricas de los tres tipos de animales. A partir de estas distribuciones se construyeron pools teóricos muestreando al azar los datos, y evaluando los resultados obtenidos con los límites teóricos que se esperarían en pools de muestras (ver figura al pie). Con ello se obtuvieron estimaciones de sensibilidad y especificidad del modelo para cada tamaño de pool. Considerando el hecho que los muestreos en un rebaño no suelen realizarse al azar, y que se seleccionan aquellos individuos que sean sospechosos de estar enfermos, se repitieron los análisis eliminando los individuos sanos, atendiendo a su menor posibilidad de ser seleccionados en un muestreo. Finalmente, separando los datos por granjas también se evaluó si se diagnosticarían correctamente las diferentes explotaciones cómo afectadas de CP o no.

Ninguna de las alternativas testadas en este trabajo (muestreo al azar, muestreo dirigido y muestreo por granjas) permite plantearse los pooles de sueros como un método alternativo de diagnóstico de la CP. Las estimaciones de sensibilidad y especificidad no son suficientes buenas como para garantizar una técnica diagnóstica fiable. A causa de la gran variabilidad que presentan las cargas de PCV2 en todas las categorías analizadas (S, E y A) se detectarían con demasiada facilidad falsos positivos y/o negativos. De alguna manera se obtuvieron unos resultados muy similares a los que se consiguen con una técnica de PCR cuantitativa usada en sueros individuales, con lo que el formato de pooling podría ser una herramienta interesante en el sentido de disminución de coste cuando se realizan pruebas con una PCR de estas características.

Artículo original:
Cortey M, Napp S, Alba A, Pileri E, Grau-Roma L, Sibila M, Segalés J. Theoretical and experimental approaches to estimate the usefulness of pooled serum samples for the diagnosis of postweaning multisystemic wasting syndrome. J Vet Diagn Invest. 2011 Mar;23(2):233-40.
Modelo propuesto para la detección de CP a partir de los límites teóricos de qPCR. En función del resultado obtenido para la qPCR y el número de individuos mezclados en una muestra, se han categorizado los resultados como negativos para qPCR, sin CP, dudosos o con CP.
Modelo propuesto para la detección de CP a partir de los límites teóricos de qPCR. En función del resultado obtenido para la qPCR y el número de individuos mezclados en una muestra, se han categorizado los resultados como negativos para qPCR, sin CP, dudosos o con CP.
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