albeitar.portalveterinaria.com

Identificación de patógenos causantes de mastitis a partir de muestra de leche y no lácteas

Mediante la técnica de MALDI-TOF

martes 02 de octubre de 2018, 10:39h

Los resultados de este estudio indican que se trata de una herramienta valiosa para la identificación y tipificación de ciertos patógenos a partir de muestras de leche, pero su utilidad es menor para la identificación de aislados de muestras no lácteas.

(Foto: CC0 Licensed - Ehrecke)
(Foto: CC0 Licensed - Ehrecke)

La técnica de MALDI-TOF (Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight) es un método rápido y fiable, que es capaz de identificar una gran variedad de bacterias una vez aisladas. El MALDI-TOF funciona mediante el uso de excitación de proteínas por láser para crear un patrón de espectro único para cada microorganismo.

Tal y como publica la página web del CReSA, los perfiles creados por esta técnica pueden considerarse como huellas dactilares, ya que varían considerablemente entre microorganismos. Los resultados se comparan con miles de espectros en una base de datos de referencia, a partir de la cual se llega a una identificación bacteriana.

Este ensayo presenta dos ventajas importantes:

  • Proporciona una nueva plataforma de diagnóstico que supera las limitaciones de los diagnósticos tradicionales, que requieren mucho tiempo y son laboriosos.
  • Elimina la necesidad de la fermentación de azúcares o el uso de kits de identificación.

En los últimos años, los estudios de investigación han mostrado que MALDI-TOF es una herramienta de diagnóstico poderosa y fiable para la identificación y discriminación de patógenos causantes de mastitis, incluidos los estafilococos no aureus (NAS) de la mastitis bovina.

El objetivo de este estudio* fue evaluar la capacidad de tipado del ensayo MALDI-TOF para la identificación y diferenciación de especies NAS de bovinos en muestras de leche y muestras de piel de los pezones asépticamente recolectadas. Estudios de investigación anteriores describieron el uso del MALDI-TOF para la identificación de NAS a partir de leche, pero el ensayo nunca se había estudiado para identificación de NAS de muestras no lácteas o ambientales.

Material y métodos

Se seleccionaron aleatoriamente de 14 a 20 vacas con un elevado recuento de células somáticas (indicador de mastitis) de ocho rebaños lecheros.

De estos animales se recogieron hisopos de piel de pezones y muestras de leche cruda de los cuartos traseros derecho e izquierdo. Estas muestras se recogieron de forma aséptica para su identificación preliminar mediante el cultivo bacteriano.

Las colonias de muestras con sospecha clínica de tener NAS se identificaron a nivel de especie mediante MALDI-TOF.

Resultados

De los 511 aislados de 284 cuartos (142 vacas), el 78 % (n = 399) fueron identificados por MALDI-TOF. El porcentaje de NAS correctamente identificado de la leche (91 %, 105/115) con MALDI-TOF fue mayor que el porcentaje de la piel de los pezones (68 %, 268/396).

De los aislados identificados, el 93 % (n = 373) se identificaron con éxito como NAS, mientras que los 26 restantes (7 %) mostraron ser otras especies bacterianas. De esos 26 aislamientos diferentes, uno se originó a partir de leche (Corynebacterium stationis), mientras que 25 se originaron a partir de piel de pezón: Aerococcus viridans (n = 7), Bacillus pumilus (n = 13), Enterococcus saccharolyticus (n = 1), Clostridium septicum (n = 1), Corynebacterium stationis (n = 2) y Corynebacterium case (n = 1).

La técnica MALDI-TOF identificó 85 (98/115) y 62 % (245/396) de los aislados en la primera prueba. Los aislados que no se identificaron a nivel de especie en la primera prueba se sometieron a una segunda prueba y se identificaron 47 (8/17) y 32 % (48/151) de piel de leche y pezón, respectivamente.

Después de 2 rondas de MALDI-TOF, el 22 % (n = 112) de los aislamientos no se identificaron, lo que representa 103 de la piel de los pezones y 9 de la leche. Dieciocho aislamientos sin identificación por MALDI-TOF se identificaron con éxito a nivel de especie mediante la secuenciación, donde 16 se identificaron correctamente como NAS, mientras los otros dos resultaron ser Corynebacterium stationis.

Discusión

Estos hallazgos indican que MALDI-TOF es una herramienta valiosa para la identificación y tipificación de las especies de NAS a partir de muestras de leche, pero es menos útil para la identificación de aislados de muestras no lácteas. Además, tanto en la primera como en la segunda ronda, el rendimiento de MALDI-TOF para la identificación de aislados procedentes de la leche fue mayor que para los procedentes de la piel de los pezones.

Una posible explicación es que estas bacterias no identificadas de la piel de los pezones provienen de su microbiota natural (bacterias comensales), que no se han incluido previamente en la base de datos presente en el sistema, que tiene una representación principal de agentes patógenos.

Además, los hallazgos mostraron que la gran mayoría de los aislamientos de NAS no identificables se originaron a partir de la piel de los pezones. Para explicar este hecho los autores propusieron dos teorías sobre estos aislamientos:

  • Que sean nuevas especies NAS.
  • Que sean especies NAS conocidas pero no incluidas en su base de datos.

Por otro lado, los autores notificaron que los aislamientos de NAS que se originaron en la piel de los pezones pueden requerir rondas adicionales para su identificación por MALDI-TOF en comparación con los que se originan a partir de la leche. Una posible explicación podría ser que estos aislados bacterianos del ambiente pueden haber desarrollado una capa extra o una cápsula de material proteico como medio de protección contra condiciones ambientales desfavorables.

Conclusiones
Estos hallazgos mostraron que MALDI-TOF es un ensayo fiable para la identificación y diferenciación de especies NAS de muestras de leche asépticamente recolectadas. El ensayo se puede usar para la identificación de especies NAS a partir de hisopos de piel de pezones, pero la confirmación con herramientas basadas en ácidos nucleicos es vital para la identificación precisa de algunas especies y cepas.

*Mahmmod IS, Nonnemann B, Svennesen L, Pedersen K, Klaas IC. Typeability of MALDI-TOF assay for identification of non-aureus staphylococci associated with Bovine intramammary Infections and TEAT apex Colonization. Journal of Dairy Science Volume 101, Issue 10, October 2018, Pages 9430-9438. doi: 10.3168/jds.2018-14579.

¿Te ha parecido interesante esta noticia?    Si (3)    No(0)
Compartir en Google Bookmarks Compartir en Meneame enviar a reddit compartir en Tuenti


Normas de uso

Esta es la opinión de los internautas, no de Albéitar Portal Veterinaria

No está permitido verter comentarios contrarios a la ley o injuriantes.

La dirección de email solicitada en ningún caso será utilizada con fines comerciales.

Tu dirección de email no será publicada.

Nos reservamos el derecho a eliminar los comentarios que consideremos fuera de tema.